Obsah
Chemické sloučeniny cetyltrimethylamoniumbromid, hexadecyltrimethylamoniumbromid, palmityltrimethylamoniumbromid a cetrimoniumbromid jsou také známy CTAB. Chemikálie se používá jako udržovač pH v sekvenčním genomu DNA, zejména v rostlinách.
Vzorec CTAB
Množství vzorců různých CTAB chemikálií se liší v závislosti na laboratoři. Všechny složky však zahrnují 1 M Tris HC1 pH 8,0, 0,5 M EDTA, 5 M NaCl a H20 (někdy dvakrát destilované). V případě CTAB složky používají některé laboratoře cetyltrimethylamoniumbromid a další hexadecyltrimethylamoniumbromid.
Příprava rostlinných tkání
Příprava rostlinné tkáně se může lišit v závislosti na materiálu. Stěny a buněčné membrány musí být rozlomeny, aby se získal přístup k jadernému materiálu bez jakékoli degradace. Normálně při mletí umožňuje rostlinný materiál s kapalným dusíkem přístup k DNA, která udržuje škodlivé buněčné enzymy a neaktivní chemikálie.
Suspenze a odstředění
Rozdrcená tkáň se umístí na čepel CTAB a vloží do misky s tekoucí vodou. Poté se smísí s chloroformem a odstředí, aby se oddělily rozpustné proteiny a další materiály. DNA se pak vysráží z vodné fáze a opatrně se promyje, aby se odstranily kontaminující soli. Vyčištěná DNA se pak odebere a uloží na TE sklíčku nebo sterilní destilované vodě.